检索规则说明:AND代表“并且”;OR代表“或者”;NOT代表“不包含”;(注意必须大写,运算符两边需空一格)
检 索 范 例 :范例一: (K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 范例二:J=计算机应用与软件 AND (U=C++ OR U=Basic) NOT M=Visual
作 者:赵立娜[1,2] 崔言顺[1] 任建亭 李建亮[1] 黄兵[2] 李玉峰[2] 马秀丽[2]
机构地区:[1]山东农业大学动物医学院,山东泰安271018 [2]山东省农业科学院家禽研究所,山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室,山东济南250023 [3]山东省东营市广饶县中等专业中学,山东广饶257300
出 处:《浙江农业学报》2011年第2期258-262,共5页Acta Agriculturae Zhejiangensis
基 金:山东省自然基金项目(Z2006D06);家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放课题;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009YY019)
摘 要:采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHVVP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。The VP1 gene of strain JFX08 of Duck hepatitis virus(DHV) genotype C was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR).To obtain expression plasmid pET-32a-VP1,the VP1 gene was cloned into pMD18-T and pET-32a(+)vectors.SDS-PAGE analysis revealed that the recombinant VP1 protein of genotype C of Duck hepatitis virus was expressed in Escherichia coli BL21(DE3) at a high level after being induced with isopropylthio-β-D-galactoside(IPTG) stably.Western-blot revealed that the recombinant protein was recognized specifically by antisera against the genotype C of Duck hepatitis virus.Four-week-old SPF chickens were immunized with the purified recombinant protein.ELISA established by the purified recombinant protein and DHV genotype C revealed that the titer of antiserum was 1∶25 600 and 1∶51 200 respectively,which indicated that the recombinant protein had good immunogenicity.
关 键 词:鸭肝炎病毒 基因C型 VP1基因 克隆表达 多克隆抗体
分 类 号:S858.32[农业科学—临床兽医学]
正在载入数据...
正在载入数据...
正在载入数据...
正在载入数据...
正在载入数据...
正在载入数据...
正在载入数据...
正在链接到云南高校图书馆文献保障联盟下载...
云南高校图书馆联盟文献共享服务平台 版权所有©
您的IP:216.73.216.120