突变敏感性分子开关快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变  

作　　者：郭紫芬[1] 兰芬[1] 周翠兰[1] 李凯[1,2] 廖端芳[1,3] 

机构地区：[1]南华大学药物药理研究所,湖南省衡阳市421001 [2]苏州大学第二附属医院分子医学中心,江苏省苏州市215004 [3]湖南中医药大学药学院中医诊断学系,湖南省长沙市410208

出　　处：《中国动脉硬化杂志》2011年第3期196-196,共1页Chinese Journal of Arteriosclerosis

基　　金：国家高技术研究发展863计划(2008AA02Z436)

摘　　要：目的利用高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关联合琼脂糖凝胶电泳,建立对肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变进行快速筛查的技术平台。方法应用PCR反应扩增包含MYH7基因Ala26Val突变区域的基因序列,通过基因克隆技术与反向PCR体外定点突变技术,分别得到MYH7基因Ala26Val突变的野生模板与突变模板,并通过基因测序分析进行确证。设计与Ala26Val突变位点配对及三末端不配对的3′硫化修饰正向引物,在其下游设计一条反向引物,分别构成野生引物对与突变引物对,进行高保真DNA聚合酶介导的双向引物延伸反应,利用凝胶成像系统对其PCR结果进行分析。结果当突变引物对与突变模板配对时,引物被延伸,有PCR产物;与野生模板不配对时,引物却不能被延伸,无PCR产物。同样,野生引物对只有与野生模板匹配时得以延伸,而与突变模板不匹配时则不能延伸。结论高保真DNA聚合酶偶联硫化修饰引物构成的突变敏感性分子开关能够快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变,达到非此即彼的二元化效果,该分子开关在肥厚性心肌病基因筛查中具有巨大的潜在应用价值。

关 键 词：单碱基多态性 三末端标记引物 高保真DNA聚合酶 错配纠正 

分 类 号：R542.2[医药卫生—心血管疾病]