利用分泌型荧光素酶体外长期监测小鼠肝脏microRNA活性  

Long-term ex vivo monitoring of in vivo microRNA activity in liver using a secreted luciferase sensor

作　　者：王刚[1] 董小岩[1,2,3] 胡键阳[1,4] 田文洪[1] 尉迟捷[1] 王岳[1] 吴小兵[1] 

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,病毒基因工程国家重点实验室,北京100052 [2]复旦大学生命科学学院,遗传工程国家重点实验室,上海200433 [3]北京五加和分子医学研究所,北京100176 [4]宁夏医科大学附属医院肝胆外科,银川750004

出　　处：《中国科学：生命科学》2011年第4期273-280,共8页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：国家科技重大专项(批准号:2008ZX10002-023和2008ZX10001-012);病毒基因工程国家重点实验室自主课题(批准号:2008-S-0003)资助项目

摘　　要：活体动物microRNA(miRNA)检测技术对阐明miRNA的生物学功能非常重要.但是,目前缺乏一种方便灵敏的实时反映活体动物miRNA活性及其变化的体外监测手段.通过在分泌型荧光素酶Gluc(Gaussia princeps luciferase)mRNA的3′非翻译区插入相应miRNA的靶序列构建一系列miRNA传感器.将miRNA传感器体外转染培养细胞和通过水动力注射方法转染小鼠肝脏,通过检测细胞培养上清和外周血液中的Gluc来反映细胞内和活体动物肝脏的miRNA活性.结果显示,CMV启动子驱动的miRNA传感器可以长期监测体外培养细胞中的miRNA和短期监测小鼠肝脏的miRNA,但由于启动子在肝脏的沉默不能用于长期监测肝脏miRNA;CAG启动子驱动的传感器则成功地实现了对肝脏内源性miR-122,miR-142和miR-34a以及对肝脏过表达的miR-34a的长期实时监测.利用以Gluc为报告基因的miRNA传感器,通过检测外周血Gluc可以方便地在体外长期连续监测小鼠肝脏的miRNA.

关 键 词：microRNA传感器 分泌型Gaussia荧光素酶 体外监测 

分 类 号：Q503[生物学—生物化学]