小鼠TOll样受体3基因的克隆及真核表达  

Cloning and Expression of Gene Murine Toll-like Receptor 3

作　　者：彭丽娜[1] 李力[2] 邱亚峰[1] 缪剑华[2] 王晓杜[1] 徐永莉[2] 史子学[1] 邵东华[1] 魏建超[1] 马志永[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [2]广西壮族自治区药用植物园,南宁530023

出　　处：《生物技术通报》2011年第6期94-98,共5页Biotechnology Bulletin

基　　金：广西自然科学基金重点项目(桂科自08320152)

摘　　要：采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中克隆小鼠Toll样受体3(TLR3)基因,基因测序表明获得了小鼠全长TLR3cDNA,构建了真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-TLR3。重组质粒转染293T细胞,Western blotting检测蛋白表达,表达蛋白质的相对分子量与预计相符。采用TLR3的阳性刺激物poly(I:C)刺激重组质粒转染的293T细胞,双荧光素酶报告基因系统检测发现能激活下游转录因子NF-κB的转录活性,并能诱导TLR3下游细胞因子IL-6和TNF-α的表达。小鼠TLR3基因的克隆和表达,为研究TLR3介导的信号通路及其在抗病毒免疫中的作用打下基础。Full-length eDNA of murine Toll-like receptor 3 （TLR3） was cloned by RT-PCR and inserted into p3XFLAG-CMV-7. 1 plasmid to generate a recombinant plasmid p3XFLAG-CMV-7. 1-TLR3. The recombinant plasmid expressing TLR3 were transfeeted into 293T ceils and the expression of TLR3 was confirmed by Western blotting. Stimulation of the transfeetants with poly（ I： C） ,a agonist of TLR3 ,resulted in the activation of NF-κB and a increased expression of IL-6 and TNF-α. The cloned TLR3 would provide a useful tool for investigation of its role in antiviral immunity.

关 键 词：TLR3 NF-ΚB 基因表达 信号转导 

分 类 号：S858.91[农业科学—临床兽医学] Q78[农业科学—兽医学]