成骨诱导双基因共表达腺病毒载体的构建  

作　　者：徐绘华[1] 郭奇峰[1] 厉新妍[1] 刘青华[1] 向帅[1] 娄盼 

机构地区：[1]广州医学院附属广州市第一人民医院,广州510180

出　　处：《中华显微外科杂志》2011年第3期217-220,共4页Chinese Journal of Microsurgery

基　　金：广东省科技计划项目（20108031500005）;广州市科技支撑计划项目（2010J-E021-1）;广州市医药卫生科技项目（201102A212029）

摘　　要：目的探讨用一条Link序列T2A连接骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因构建含目的基因的腺病毒载体的可行性。方法先从cDNA中扩增得到全长BMP-2和bFGF基因片段．再接于Link序列T2A的两端，通过T2APeptide的互补，延伸得到BMP2-T2A—bFGF的全长PCR产物，利用上游引物的BglⅡ酶切位点和下游引物的EcoRV酶切位点将其插入到pShuttle—IRES载体中，酶切、测序鉴定；利用同源重组技术将目的基因表达框从穿梭质粒转移到腺病毒载体，鉴定阳性克隆；将PacI线性化后的腺病毒载体转染到293A细胞，观察GFP表达，PCR鉴定后进行大量扩增，并用CsCl梯度离心法进行纯化；测量A260计算病毒感染滴度。结果克隆得到的BMP-2与bFGF基因测序正确，经BglⅡ和EcoRV双酶切得到的BMP2-bFGF2个基因全长序列完全克隆到穿梭质粒和重组腺病毒载体质粒中；转染293A细胞2周后观察到明显的GFP聚集表达，即病毒包装成功，扩增纯化后滴度为3．6×10^11 VP／ml。结论经酶切鉴定BMP-2与bFGF双基因共表达腺病毒载体构建成功。

关 键 词：骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 双基因共表达 T2A序列 腺病毒 

分 类 号：R6[医药卫生—外科学]