低蛋白配伍α酮酸饮食可直接影响肾损伤大鼠系膜细胞肾素-血管紧张素系统表达  

Change of renin-angiotensin system in cultured mesangial cells by serum from nephrectomized rats feeding with low protein diet and α-keto acid supplement

作　　者：殷莺[1] 龙泉[1] 尤莉[1] 李海明[1] 张力胤[1] 顾勇[1] 郝传明[1] 林善锬[1] 陈靖[1] 

机构地区：[1]复旦大学附属华山医院肾脏科复旦大学肾脏病研究所,上海200040

出　　处：《中华肾脏病杂志》2011年第6期435-441,共7页Chinese Journal of Nephrology

基　　金：上海市人才发展基金（037）;2008年德国开同研究奖励基金

摘　　要：目的观察肾损伤大鼠低蛋白配伍α酮酸饮食后是否可直接影响肾小球系膜细胞外基质（ECM）的产生和局部肾素．血管紧张素系统（RAS）的表达。方法30只雄性SD大鼠建立3／4肾切除模型，分组如下（均n=10）：正常蛋白饮食组（NPD，18％酪蛋白）、低蛋白饮食组（LPD，6．5％酪蛋白）和低蛋白配伍仪酮酸饮食组（LK，5．4％酪蛋白±1％α酮酸）。另取10只大鼠行假手术后给予正常蛋白饮食作为对照组（sham）。12周后麻醉处死大鼠，收集各组动物血清。取10％浓度的血清干预体外培养的系膜细胞48h。采用ELISA法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF-β1）及纤连蛋白（FN）的水平。采用Western印迹法和实时定量PCR法检测系膜细胞血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、FN及TGF—β1的蛋白和基因表达。结果（1）动物实验：各组大鼠体质量、血清总蛋白及白蛋白水平差异均无统计学意义，肾切除各组大鼠血肌酐及尿蛋白水平均显著高于sham组（均P〈0．05）。血肌酐水平在肾切除组间差异无统计学意义，但LPD组血尿素氮及尿蛋白水平显著低于NPD组（均P〈0．05），而LK组更低（均P〈0．05）。（2）细胞实验：NPD血清干预组细胞分泌AngⅡ水平{（12．70±0．12）mg／g蛋白比（8．04±0．62）mg／g蛋白}及ATIR基因和蛋白表达水平均显著高于sham组，同时伴有FN[（39．84±0．06）g／g蛋白比（20．58±0．46）g／g蛋白】及TGF-β1[（83．85±3．58）mg／g蛋白比（10．12±0．56）mg／g]基因转录和分泌水平的上升（均P〈0．05）；LPD及LK血清干预组可显著抑制上述改变（均P〈0．05）。应用RAS阻断剂氯沙坦可显著降低NPD组中FN及TGF—β1的合成与分泌，对LPD组中二者的表达也有进一步的抑制作用（均P〈0．05），但对LK组无明显影响。结论低蛋白配伍α酮酸饮食可维持肾切除大Objective To observe cultured mesangial cells by serum from 3/4 the changes of renin-angiotensin system （RAS） in nephrectomized rats feeding with low protein diet and α-keto acid. Methods Thirty male SD rats received 3/4 nephrectomy （Nx） were placed on 18% normal protein diet （NPD, n=10）, 6% low prolein diet （LPD, n=10） or 5% low protein plus 1% α-ketu acid diet （LK, n=10） for 12 weeks. Ten male SD sham-operated rats te.d with 18% normal protein diet were used as control （sham group）. In addition, mesangial cells were cultured in sera （10%） cullected from above animals treated with or without losartan （0.02 mmol/L） for 48 huurs. ELISA was applied to detecl the level of Ang Ⅱ, TGF-β1 and fibronectin （FN） in cell medium. Western blotting was used to determine the protein level of AT1 receptor （AT1R） and real-time PCR was used to detect the mRNA level of ATIR, TGF-β1 and FN. Results （1） Nutritional imtices including body weight, total protein and albumin had no significant difference in each group. （2） Serum creatinine and 24 h proteinuria were significantly inceased in nephrectomized groups compared to sham group （P〈0.05, respectively）. 24 h proteinuria was greatly lower in LK group than that in NPD and LPD groups （P〈0.05, respectively）. （3） LK greatly decreased the level of Ang Ⅱ [NPD（12.70±0.12） mg/g protein; sham （8.04±0.62） mg/g protein] in supernatant as well as the protein and mRNA expression of ATIR in cultured mesangial cells （P〈 0.05）. （4） NPD serum directly induced higher secretion [FN： sham （20.58±0.46） g/g protein, NPD （39.84±0.06） g/g protein; TGF-β1 sham （10.12±0.56） mg/g protein, NPD （83.85±3.58） mg/g protein] and mRNA expression of FN and TGF-β1 compared with sham group （P〈0.05）. LPD decreased these increment （P〈0.05） and LK showed stronger inhibitory effect （P〈0.05）. （5） Losartan applieatinn sharply reduced FN and TGF-β1 production both in supernatant and in mRN

关 键 词：膳食 限制蛋白质 酮酸类 肾素-血管紧张素系统 肾切除术 系膜细胞 

分 类 号：R692.5[医药卫生—泌尿科学]