缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性  

作　　者：王林林[1] 张改平[1,2] 郭军庆[2] 王丽[2] 杜晓明[1] 冯华[1] 权凯[2] 王爱萍[1] 

机构地区：[1]郑州大学生物工程系,河南郑州450001 [2]河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第8期918-920,922,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：河南省科技攻关项目资助(082300453208)

摘　　要：目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。

关 键 词：早孕因子 免疫抑制位点 原核表达 PCR 

分 类 号：R392.12[医药卫生—免疫学]