非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用  

Function of C-terminus nonmuscle myosin heavy chain Ⅱ-A to PRRSV infection of Marc-145 cells

作　　者：刘宁宁[1] 张璐[1] 吕军华[1] 高继明[1] 吴海珍[1] 肖一红[1] 周恩民[2] 

机构地区：[1]山东农业大学动物医学院/免疫生物学实验室,山东泰安271018 [2]西北农林科技大学兽医免疫学研究所动物医学院,陕西杨凌712100

出　　处：《中国预防兽医学报》2011年第8期589-592,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家自然基金(30871857;U0931003/L01);山东省自主创新成果转化重大专项(2008ZHZX1A1101);国家行业科技计划项目(200903055)

摘　　要：为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。To investigate the function of C-terminus nonmuscle myosin heavy chain II-A （NMHC II -A） to porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） infection of Marc-145 cells, a part of NMHC II -A gene （PRA） from Marc-145 cells was amplified by RT-PCR and cloned into pEGFP-N1 vector to construct recombinant plasmid pEGFP-N1-PRA for PRA overexpression in Marc-t45 cells. The results showed that the repliccation of PRRSV in the pEGFP-N1-PRA transfected Marc-145 cells was decreased by 50% in comparison with non-transfected cells by TCID50 titration and immunofluorescent assay. These results showed PRA encoding protein could influent PRRSV infection to Marc-145 cells. This finding provide a new way for further understanding of PRRSV infection to permissive cells.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NMHCⅡ-A羧基端 克隆测序 转染 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]