小麦5-氨基酮戊酸脱水酶的纯化及部分性质研究  

Purification and some properties of 5-aminolevulinate dehydratase from wheat leaf

作　　者：范军[1,2] 项艳[3] 李纯 郭蔼光[1] 

机构地区：[1]西北农业大学基础科学系 [2]安徽农业大学生物技术研究中心,合肥230061 [3]安徽农业大学生物技术研究中心

出　　处：《西北农业大学学报》1999年第6期1-6,共6页Journal of Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry（Natural Science Edition)

基　　金：国家自然科学基金!(39570066)

摘　　要：以３０％ ～６０％ 硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ 和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ），其在ｐＨ ８．５ 时比活为３１ Ｕ·ｍ ｇ－ １蛋白；酶纯化了９１ 倍，得率５％ ，酶亚基分子质量约５２ ｋｕ，全酶分子质量约３３０ ｋｕ，表明酶由６ 个亚基组成；酶的等电点为４．８，在４００ ｎｍ有吸收峰，最适反应温度４５℃，Ｍｇ２＋ 激活酶，Ｚｎ２＋ 和磷酸吡哆醛抑制酶。纯化的ＡＬＡＤ浓缩后，－ ２０℃下在０．１ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １，ｐＨ ８．５ 的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，内含５０％ 的甘油，５ ｍ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １的巯基乙醇和ＭｇＣｌ２ 中黑暗贮藏３０ ｄaminolevulinate dehydratase(ALAD) is purified to homogeneity from wheat leaves with 30%～60% ammonium sulphate fractionation,chromatography DEAE Sepharose CL 6B,Sephadex G 200,Phenyl Sepharose CL 4B and hydroxylatite.The purified enzyme has a specific activity of 31 U/mg protein at pH 8.5 with a fold of 91 and yield of 5%.It has a relative Mr of 330 ku and subunit Mr of 52 ku,thus showing six identical subunits.IEF confirms its pI is about 4.8.The enzyme has an absorption maximum at 400 nm in Tris HCl buffer,pH 8.5.It is maximally active at a temperature of 45℃ and activated by Mg 2+ , but inhibited by Zn 2+ .The purified enzyme after concentrated is stored without a loss of activity for a month at -20℃ in the dark in the 0.1 mol·L -1 Tris HCl buffer,pH 8.5,including 50% glycerol 5 mmol·L -1 2 mercaptoethanol and MgCl 2.

关 键 词：氨基酮戊酸脱水酶 小麦 酶活性 

分 类 号：S512.102[农业科学—作物学]