快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析方法的建立  

Development of a colloidal gold immunochromatographic assay for rapid detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

作　　者：李雪松[1,2] 符芳[1] 李海忠 王伟[1] 陈欣[1] 郎越坤[1] 田华彬[1] 周艳君[2] 刘永刚[1] 蔡雪辉[1] 李曦[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001 [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [3]齐鲁动物保健品有限公司,山东济南250100

出　　处：《中国预防兽医学报》2011年第9期718-722,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家国际科技合作项目(2010DFB33920)

摘　　要：为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(MAb)2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSV N蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13%和88.37%。两种方法的一致性Kappa值为0.882。建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性。该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段。A colloidal gold immunochromatographic strip（GICA） was developed for rapidly detecting porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）.The strip was composed of monoclonal antibody（MAb） 2D7,MAb 1G7 against PRRSV N protein and goat anti-mouse IgG antibody.The MAb 2D7,which labbed with colloidal gold,was used as immunodetection probe.The MAb 1G7 and goat anti-mouse IgG antibody were blotted on the nitrocellulose membrane as the test line and control line,respectively.The developed GICA specifically detected PRRSV with a detection limit of 103.0 TCID50/mL.Tested on 150 clinical samples,the specificity and sensitivity,were 98.13% and 88.38% compared with that of RT-PCR respectively.The consistency value（Kappa） of the 2 methods was 0.882.The established GICA had a good sensitivity,specificity,reproducibility and on-site application which provided a technique for rapidly detecting PRRSV in pigs.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 胶体金 免疫层析 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]