利用假病毒技术研究抗HIV-1药物的作用机制  

The action mechanisms of anti-HIV-1 compounds with pseudovirus system

作　　者：李艳丽[1] 郑永唐[2] 肖伟烈[3] 孙汉董[3] 王嵬[1] 刘利新[1] 

机构地区：[1]中国科学院研究生院生命科学学院,北京100049 [2]中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室,云南昆明650223 [3]中科院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,云南昆明650204

出　　处：《微生物学通报》2011年第10期1507-1517,共11页Microbiology China

基　　金：国家973计划项目(No.2009CB522306);国家科技重大专项"十一五"计划项目(No.2009ZX09501-029);中国科学院知识创新工程重要方向(No.KSCX2-YW-R-185)资助课题;云南省地方科技攻关项目(No.2007BC004);生命科学领域"十二五"基础前沿专项(No.KSCX2-EW-J-29)

摘　　要：采用假病毒系统对5种具有抗HIV-1活性的天然化合物的作用机制进行研究,建立了一种可在普通实验室进行抗HIV-1作用机理研究的实验平台。通过构建假病毒系统,利用定量PCR实验分析感染细胞内病毒生命周期早期的特异性DNA产物,发现5种化合物可通过不同的作用机制在早期抑制HIV-1复制。部分化合物表现出新的作用机制,如LC-1、LC-2可抑制HIV-1的入核。通过分析药物对2种不同的逆转录病毒(HIV-1和MLV)的感染性,发现LC-1可特异地阻断HIV-1的复制,而对MLV无影响。同时为了检测药物是否也会在病毒的生命周期晚期有作用,利用直接转染前病毒质粒的方式进行了验证。利用以上方法,初步确定了这几种药物的作用靶点,构建了一个有效的抗HIV-1药物作用机理的研究平台。In this study, a pseudovirus system was constructed to investigate the anti-HIV mechanisms of five natural compounds. Three plasmids containing backbone, gag-pol of HIV-1 and VSVG were transfected to 293T cells to produce pseudotyped HIV-1 virus. Real-time PCR assay was used to explore the targets of these compounds by testing the specific viral products in the early life cycle of HIV-1. With this system, the targets of four compounds have been initially identified. LC-1 and LC-2 could block the nuclear import of HIV-lpreintegration complex （PIC） into the nucleus. LC-3 could inhibit viral DNA integration to host genome. LC-4 could inhibit the activities of reverse transcriptase. Compounds LC1 and LC2 showed different action target from the existing drugs. Further study has been carried to explore the new potential action mechanism. This study showed that the pseudovirus system we constructed can be used as an assay platform to screen anti-HIV drugs.

关 键 词：假病毒系统 HIV-1 入核 病毒特异性 

分 类 号：R96[医药卫生—药理学]