用线性梯度平板准确测定药物敏感性和分离抗药性菌株  

作　　者：刘玉庆[1] 李靖冉[2] 杜加法[1] 胡明[1] 白华[1] 齐静[1] 高超[2] 魏甜甜[2] 苏红[1] 金健玲[3] 高培基[3] 

机构地区：[1]山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100 [2]青岛农业大学动物科技学院,青岛266109 [3]山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室,济南250100

出　　处：《中国科学：生命科学》2011年第9期748-755,共8页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：国家自然科学基金(批准号:81171621);山东省中青年科学家奖励基金(批准号:2006BS02008);中国博士后科学基金(批准号:20080440451)资助项目

摘　　要：菌群在药物的最低抑菌浓度附近的动力学过程是抗生素药理学研究的核心问题.建立一种能确定精确的MIC且又能准确分离抗药性菌株的方法,是目前临床对药敏实验新的要求.根据Fick扩散定律制备了线性梯度平板:将15mL含适当浓度恩诺沙星的琼脂培养基在9cm培养皿中倾斜凝固,刚好覆盖整个平板底面,然后水平放置,再在其上层加入同样体积的无药琼脂培养基,凝固12h后,药物浓度达到扩散平衡而呈均匀连续线性梯度.通过实测验证药物浓度在平板表面呈线性梯度分布.将待检E.coli菌群均匀涂布在梯度平板上,培养12h后,随恩诺沙星浓度提高依次形成连续密集小菌落区和离散大菌落区,根据两区域的分界线可以确定菌群自然形成的真实的MIC,与常规药敏实验方法测定结果一致.大菌落重新涂布高梯度平板,分界线显著上升,并检测出抗药性基因突变,表明该方法很容易筛选出菌群中的抗药性菌株.梯度平板可以方便地呈现整个菌群在MIC附近的动力学过程和遗传生理变化,并预警该抗生素使用后可能出现的抗药性,从而指导临床抗菌药物的选择和使用.

关 键 词：线性梯度平板 E.COLI 恩诺沙星 MIC 抗性菌 

分 类 号：R446.5[医药卫生—诊断学]