人CD8＋CD28一抑制性T淋巴细胞的体外扩增及其抗原特异性调节作用  

In vitro expansion of human CD8＋ CD28- suppressor T cells and their immunological regulatory effectwith antigen specificity

作　　者：余玉明[1] 刘艳君[2] 邓文锋[1] 于立新[1] 

机构地区：[1]南方医科大学南方医院器官移植科,广州151515 [2]南方医科大学基础医学院免疫学教研室

出　　处：《中华器官移植杂志》2011年第10期614-617,共4页Chinese Journal of Organ Transplantation

基　　金：基金项目：国家自然科学基金（8107[）594）;广东省自然科学基金（07300389）;广东省科技计划项目（2010803160（）240）

摘　　要：目的探讨在体外大量扩增CD8＋CD28一抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的方法，并检验其免疫调节作用。方法分离健康志愿者全血中CD8＋T淋巴细胞，在含不同细胞因子和异体抗原提呈细胞（APC）的培养条件下进行体外扩增。应用流式细胞术对扩增过程中CD28一细胞亚群的比例进行监测。分为3组进行混合淋巴细胞培养，反应细胞均为CD4’T淋巴细胞：B-Am组以来源于原致敏供者的APC作为刺激细胞，I-APC组以HLA-A、B、DR全错配的无关供者的APC作为刺激细胞，Dynabeads组以包被有抗CD3和CD28单克隆抗体的免疫微球Dynabeads作为刺激细胞；扩增后的Ts细胞作为第三方调节细胞加入混合淋巴细胞培养中，测定其对CIN’T淋巴细胞增殖的抑制作用。结果在含白细胞介素2（IL-2）＋IL-7＋IL-15的培养条件下，CD8＋T淋巴细胞培养后CD8＋CD28T淋巴细胞亚群的比例最高（P〈0．05）。BAPc组不加入Ts细胞时，增殖的CD4＋T淋巴细胞比例为66．7％，当加入的Ts细胞与反应细胞的比例分别为0．5：1、0．1：1和0．02：1时，增殖的CD4＋T淋巴细胞比例分别为16．5％、34．1％和62．6％。Ts细胞对CIN’T淋巴细胞的增殖有明显抑制作用，而在I—Apc组和Dynabeads组中，此抑制作用不明显。结论应用含IL-2＋IL_7＋IL_15的培养条件联合异体APC刺激可以在体外大量扩增Ts细胞，扩增所得Ts细胞在体外对供者CD4＋T淋巴细胞的增殖有明显抗原特异性抑制作用。Objective To study the In vitro expansion of human CD8 ＋ CD28- suppressor T cells and their immunological regulatory effect. Methods Human CD8 ＋ CD28- suppressor T cells were expanded in vitro driven by the combination of cytokines and allogeneic antigen presenting cells （APCs）. Flow cytometry was used to assess the development of CD28- subpopulation. Expanded CD8＋ CD28- T cells were isolated by immunomagnetic microspheres and then added as third part modulators into mixed lymphocyte culture to assess their immunological regulatory characteristics. Results The combination of cytokines included IL-2, IL-7 and IL-15 and allogeneic APCs could increase the portion of CD8＋ CD28- T cell subtype, and expansion fold of CD8＋ CD28＋ T cell subtype was significantly increased as compared with others （P〈0. 05）. Expanded CD8＋ CD28- T cells could suppress the proliferation of CD4＋ T cells stimulated by allogeneic APCs. Moreover, this suppression had antigen specificity. Conclusion Human CD8 ＋ CD28- suppressor T cells can be in vitro expanded in large amounts driven by the combination of cytokines and allogeneic APCs. Expanded CD8 ＋ CD28- T ceils in this study have antigen specific regulatory characteristics.

关 键 词：单核细胞 细胞培养技术 CD8阳性T淋巴细胞 T淋巴细胞 抑制效应 

分 类 号：R392.1[医药卫生—免疫学]