携带钙整合素结合蛋白基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞系的建立  

作　　者：王晓辉[1] 惠玲[1] 吕同德[1] 哈小琴[1] 王剑峰[2] 张军莉[2] 杨霄鹏[1] 

机构地区：[1]兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃兰州730050 [2]兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃兰州730050

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2011年第10期1143-1145,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30400125);甘肃省自然科学基金资助项目(1107RJZA106)

摘　　要：目的:构建钙整合素结合蛋白(CIB)的逆转录病毒表达载体,并建立包装细胞系。方法:质粒pet32-CIB经EcoRI和XhoI双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB,PCR及双酶切鉴定后,通过脂质体转染导入包装细胞pA317,G418稳定筛选后获得抗性克隆,NIH3T3细胞进行逆转录病毒颗粒滴度测定。结果:重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB质粒测序结果与GenBank中序列一致,经PCR及酶切鉴定证实,获得了大约574bp的基因片段,且正确插入pLXSN-CIB载体中;建立了pA317-CIB包装细胞系,采用NIH3T3细胞测定病毒滴度为6.81×105CFU/mL。结论:pLXSN-CIB结构正确,成功构建了CIB基因的逆转录病毒表达载体并建立了pLXSN-CIB包装细胞系。

关 键 词：CIB 载体构建 逆转录病毒载体 PLXSN 

分 类 号：Q513[生物学—生物化学] Q78