Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D的晶体结构解析(英文)  

X-ray diffraction analysis of glycoprotein D from Herpes simplex virus type 2

作　　者：陈竹君[1,2] 逯光文[2] 齐建勋[2] 许翔[1,2] 张娜[2] 严景华[2] 王荣富[1] 

机构地区：[1]安徽农业大学生命科学学院,合肥230036 [2]中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室,北京100101

出　　处：《生物工程学报》2011年第10期1499-1506,共8页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2010CB530104);安徽省教育厅自然科学基金重大项目(No.KJ2010ZD04)资助~~

摘　　要：Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（Glycoprotein D,gD）在介导该病毒入侵到宿主细胞中起着关键作用。为了更好地研究gD在病毒侵入过程中的作用机制,利用杆状病毒表达系统表达了gD胞外部分区域（1~285 aa）,通过Ni-NTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后,得到的带His标签的分泌型可溶蛋白,用悬滴法对该蛋白进行了晶体筛选,获得了高质量的晶体。晶体生长条件为0.1 mol/L Hepes缓冲液（pH 7.2）,5%（V/V）2-甲基-2,4-戊二醇（MPD）,10%PEG10000,18℃。晶体能够衍射到1.8℃,属于P21空间群,晶胞参数为a=63.6,b=55.4,c=65.3,β=96.3°。该晶体的获得将为进一步研究gD的结构提供了基础,也为gD等同类囊膜蛋白的表达、纯化及结构研究提供了重要的参考。Glycoprotein D（gD） of Herpes simplex virus type 2（HSV-2） is a key factor mediating the entry of HSV-2 into host cells.In order to explain the mechanism underlying the gD-mediated receptor-binding and viral entry,we performed a structural study on HSV-2 gD.The ectodomain of the gD protein encompassing residues 1 to 285 was expressed by baculovirus-infected insect cells as a secreted soluble protein with a C-terminal hexa-his tag.The protein was then purified by affinity and size-exclusion chromatography.The purified protein was successfully crystallized using the hanging-drop vapor-diffusion at 18 °C in a condition consisting of 0.1 mol/L Hepes pH 7.2,5%（V/V） 2-methyl-2,4-pentanediol（MPD） and 10% PEG 10 000.The crystals diffracted to 1.8 ？ resolution and belonged to space group P21,with unit-cell parameters a=63.6,b=55.4,c=65.3 ？,β=96.3°.

关 键 词：杆状病毒表达系统 纯化 Ⅱ型单纯疱疹病毒 糖蛋白D结晶 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]