牛膝ISSR-PCR反应体系的优化  

作　　者：王强[1,2] 金则新[2] 祁彩虹[2,3] 李钧敏[2] 彭礼琼[2,4] 

机构地区：[1]上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234 [2]台州学院生态研究所,台州临海317000 [3]西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆400715 [4]北京林业大学自然保护区学院,北京100083

出　　处：《江苏农业科学》2011年第5期24-26,共3页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：浙江省自然科学基金(编号:Y507660)

摘　　要：采用改进的SDS法提取牛膝(Achyranthes bidentata)基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于牛膝ISSR分析的扩增条件:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris.HC l,pH值8.8,100 mmol/LKC l,1%TritonX-100,100 mmol/L(NH4)2SO4,15 mmol/L MgC l2),1.5 UTaqDNA聚合酶,2 mg/mL BSA,15 ng模板DNA,10 pmol引物,0.5 mmol/L dNTP,2.0 mmol/L Mg2+。利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对24个牛膝个体的DNA进行扩增,共得到85个位点,其中74个为多态位点,多态位点百分率为87.06%,Ne i指数为0.330 3,Shannon信息指数为0.490 5,表明牛膝的遗传多样性处于较高水平。

关 键 词：牛膝 ISSR 优化 遗传多样性 

分 类 号：S567[农业科学—中草药栽培]