Smurf1基因靶向RNAi慢病毒载体的构建及转染  

Construction of recombinant lentiviral vector of RNAi targeting Smurf1 gene and its expression in U20S cells

作　　者：袁恒锋[1] 何崇儒[1] 高金巍[1] 徐卫东[1] 

机构地区：[1]第二军医大学长海医院骨科,上海200433

出　　处：《第二军医大学学报》2011年第10期1147-1150,共4页Academic Journal of Second Military Medical University

基　　金：上海市基础研究重点项目(08JC1406700)~~

摘　　要：目的构建Smad泛素调节因子1(Smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对Smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建Smurf1基因过表达质粒,同时针对Smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建RNAi慢病毒载体。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western印迹法进行外源筛靶,筛靶出成功的干扰质粒PSC2939。用慢病毒包装PSC2939后感染U20S细胞,进行内源验证,荧光定量PCR和Western印迹检测U20S细胞中Smurf1mRNA及蛋白的表达。结果经PCR及测序证实,Smurf1基因过表达载体及4种干扰载体均成功构建;Western印迹外源筛靶显示,PSC2939干扰载体能有效敲减目的基因的表达;慢病毒包装后的PSC2939干扰载体能有效抑制U20S细胞中Smurf1蛋白的表达,对Smurf1mRNA的抑制率达到60%以上。结论成功构建可供感染的Smurf1基因RNAi慢病毒载体,为进一步研究Smurf1基因在骨肉瘤细胞中的作用提供了有效的实验工具。

关 键 词：RNA干扰 Smurf1 骨肉瘤 慢病毒属 

分 类 号：R349.64[医药卫生—基础医学]