17β-雌二醇抑制高同型半胱氨酸诱导破骨细胞Raw 264.7激活的作用研究  

The effects of 17β-estradiol attenuated homocystine-induced activation of Raw 264.7 cells

作　　者：何颖[1] 陈学秋 宗一[1] 詹东[1] 杨萍[1] 刘世昌[1] 陆地[1] 桂莉 

机构地区：[1]昆明医学院人体解剖学教研室,云南昆明650500 [2]云南省中医学院人体解剖学教研室,云南昆明650500 [3]云南省第三人民医院内分泌科,云南昆明650000

出　　处：《云南大学学报（自然科学版）》2011年第6期716-722,共7页Journal of Yunnan University(Natural Sciences Edition)

基　　金：国家自然基金资助项目(30860336;30560170);云南省科技厅-昆明医学院联合资助项目(2008CD016;2010CD156;2011CD041);云南省应用基础研究重点资助项目(2008CC007);云南省中青年学术和技术带头人后备人才培育资助项目(2009CI033);昆明医学院研究生创新基金资助项目(2011J01)

摘　　要：探讨17-β雌二醇(17β-Estradiol,17β-E2)对高同型半胱氨酸(High Homocystine,HHcy)诱导的破骨前体细胞株Raw 264.7炎性因子释放的抑制作用.用同型半胱氨酸(Homocystine,Hcy)刺激Raw264.7细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测17β-E2对Raw 264.7细胞的活力影响,免疫荧光双标和RT-PCR方法检测不同浓度17β-E2(1,10 nmol/L和1μmol/L)对环氧合酶-2(COX-2)和细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)、炎性信号蛋白核因子-κB(NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化.结果发现:不同浓度的17β-E2在翻译水平和转录水平上明显抑制了Hcy诱导的细胞炎性蛋白酶COX-2和iNOS,细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调,并且COX-2和IL-1β蛋白和mRNA的表达呈剂量依赖性.上述结果表明17β-E2可通过调控Hcy诱导的破骨前体细胞株Raw264.7细胞炎性因子释放从而抑制破骨激活,发挥抗骨质疏松的作用.To investigate suppressing effects of 17β - Estradiol （ 17β - E2 ） in the activation of Raw 264.7 cells,the cells were treated with 17β -E2 prior to Homocystine （Hcy） exposure,then the effects on the mRNA and protein levels of pro - inflammatory enzymes, cyclooxygenase - 2 （ COX - 2） and inducible nitric oxide synthase （ iNOS）, and pro - inflammatory cytokines, tumor necrosis factor - α（ TNF - α）, and interleukin - 1β （ IL - 1β ）, inflammatory signaling proteins nuclear factor - κB （ NF - κB） were analysed by reverse transcription - polymerase chain reaction （RT- PCR） and double -immunofluorescence labeling assay,and the effects of 17β - E2 on viability of Raw 264.7 cells were measured by MTT assay. The results showed that 17β - E2 had an effect on COX - 2, iNOS, TNF - α, IL - 1β, NF - κB protein and mRNA expression levels. Arising from the above ,we think 17β -E2 can restrain osteoclasts activity by means of regulation Hcy- induced pro -inflammatory mediators in Raw 264.7 cells, and exert its anti -osteoporosis actions.

关 键 词：17Β-雌二醇 同型半胱氨酸 炎性因子 RAW 264.7细胞 逆转录PCR 

分 类 号：Q591.8[生物学—生物化学]