盐酸多西环素对重组质粒pBI-EGFP-hHO-1表达的调控  

作　　者：杨婧[1] 张海风[1] 王媛[1] 赵勤[1] 张新胜[1] 单杰[1] 

机构地区：[1]郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,河南郑州450001

出　　处：《中国老年学杂志》2011年第21期4193-4196,共4页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：郑州市科技局(No.083SGYS33263-10)

摘　　要：目的构建Tet-off调控的血色素氧化酶-1(HO-1)真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其表达的调控剂量。方法利用分子生物学技术,将hHO-1基因与质粒pBI-EGFP连接构成重组质粒。NheI和MluI双酶切鉴定后采用RT-PCR技术及免疫细胞化学的方法检测其在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达情况。利用RT-PCR技术检测Tet-off和pBI-EGFP-hHO-1双转染后不同浓度盐酸多西环素对hHO-1基因mRNA表达量的影响,确定该四环素调控系统的盐酸多西环素诱导量。结果用NheI和MluI双酶切证明hHO-1成功克隆入应答质粒pBI-EGFP;RT-PCR、免疫细胞化学检测结果表明重组质粒在SMMC-7721细胞中表达;经RT-PCR检测显示当盐酸多西环素浓度≥2 000 ng/ml时,HO-1基因mRNA表达降低,与未转染组接近。结论成功构建了由Tet-off调控的真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其调控剂量为2 000 ng/ml。

关 键 词：血色素氧化酶-1 Tet-off诱导表达系统 盐酸多西环素 

分 类 号：R393[医药卫生—基础医学]