一种优化翻译起始效率的方法  

作　　者：王易伦[1] 郭瀛军[1] 戴建新[1] 裘敏燕 陆长德[2] 

机构地区：[1]第二军医大学分子遗传教研室,上海200433 [2]中国科学院上海生物化学研究所,上海200032

出　　处：《生物技术通讯》1995年第2期87-90,共4页Letters in Biotechnology

摘　　要：本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。

关 键 词：翻译起始 表达调控 T7 RNA聚合酶 Β-半乳糖苷酶 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]