猪嗜血支原体ORF9的全基因合成及原核表达  

Synthesizing and prokaryotic expression of Mycoplasma haemosuis ORF9 gene

作　　者：周栋[1,2] 刘建柱[1] 张璐[1] 成子强[1] 牛绪东[1] 刘海涛[1] 刘永夏[1] 杨笃宝[1] 王淑静[1] 

机构地区：[1]山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安271018 [2]中国农业大学动物医学院,北京100193

出　　处：《中国预防兽医学报》2011年第12期985-987,共3页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：山东省中青年科学家奖励基金(BS2009NY007);中国博士后基金特别资助(200801417);山东省博士后创新项目专项基金(200801001)

摘　　要：为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中构建重组表达质粒pET-ORF9,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和western blot鉴定表明,重组蛋白的分子量约为34 ku。In this study, the ORF9 gene of Mycoplasma haemosuis was amplified by SOE-PCR with four pairs of oligonucleotides synthesized according to reference strain （AJ504999） in GenBank with E. coli biased codons, and the gene was cloned into pET-32a for expression in E. coli （DE3）. The resultant recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 （DE3） and the recombinant protein was expressed with 1 mmol/L IPTG induction at 37℃. SDS-PAGE analysis shown that the recombinant protein was about 34 ku which was recognized by anti-His monclonal antibody by western blot.

关 键 词：猪嗜血支原体 ORF9 全基因合成 原核表达 

分 类 号：S852.7[农业科学—基础兽医学]