暗纹东方鲀SRAP-PCR体系的建立与优化  

Establishment and optimization of SRAP-PCR amplification system in Takifugu obscurus

作　　者：程长洪[1] 张敏莹[2] 刘凯[2] 徐东坡[2] 段金荣[2] 周彦锋[2] 施炜纲[2] 

机构地区：[1]南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡214081 [2]农业部长江下游渔业资源环境科学观测实验站,中国水产科学研究院内陆渔业生态环境和资源重点开放实验室,中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡214081

出　　处：《浙江农业学报》2011年第6期1084-1089,共6页Acta Agriculturae Zhejiangensis

基　　金：公益性行业(农业)科研专项/长江下游水生生物增殖放流研究及数字化平台开发(20090304803);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院淡水渔业研究中心)(2011JBFA052011JBFA06)

摘　　要：以暗纹东方鲀基因组DNA为材料,利用正交设计L16(45)对影响暗纹东方鲀SRAP-PCR反应的5个因素(Mg2+、Taq酶、dNTPs、模板DNA、引物)在4个水平上进行正交组合,确立了暗纹东方鲀SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+1.5 mmol·L-1、Taq酶0.5 U、模板DNA 75 ng、dNTPs 0.15 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1。利用30个暗纹东方鲀样本对该体系进行验证,结果表明该体系稳定可靠。Using genomic DNA of Takifugu obscurus,SRAP-PCR amplification system of Takifugu obscurus was optimized using orthogonal design based on five influencing factors of the amplification efficiency（Mg2＋,Taq DNA polymerase,dNTPs,DNA template,primer） at four levels.The results showed that the optimal 20 μL SRAP-PCR reaction system contained Mg2＋ 1.5mmol·L-1,TaqDNA polymerase 0.5 U,dNTPs 0.15 mmol·L-1,template DNA 75 ng and primer 0.2 μmol·L-1.The optimized SRAP-PCR system was tested for 30 Takifugu obscurus germplasms and proved to be stable and reliable.

关 键 词：暗纹东方鲀 SRAP 正交设计 优化 

分 类 号：S917[农业科学—水产科学]