HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立  

作　　者：白文栋[1,2] 席文锦[1,2] 王芳[3] 王丽娟[4] 杨韬[1,2] 彭红艳[5] 孟艳玲[1,2] 杨安钢[1,2] 

机构地区：[1]第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室 [2]第四军医大学免疫学教研室 [3]第四军医大学微生物学教研室 [4]西安交通大学医学院第一附属医院,陕西西安710061 [5]第四军医大学西京医院内分泌科,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2012年第1期94-96,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81001015/H1611)

摘　　要：目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。

关 键 词：免疫促凋亡蛋白 HER2 真核表达 定点整合 CHO工程细胞株 

分 类 号：R392.9[医药卫生—免疫学]