谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素．链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用  

作　　者：汪海东[1] 楼旭丹[1] 夏世金[2] 张晓丽[3] 孙皎 

机构地区：[1]复旦大学附属华东医院内分泌科,上海200040 [2]复旦大学附属华东医院上海市老年医学研究所 [3]复旦大学附属华东医院肾内科

出　　处：《中国老年学杂志》2012年第2期320-322,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：复旦大学附属华东医院院级课题(No.H558);上海市科委科技发展基金基础研究重点课题(No.10JC1404800)

摘　　要：目的建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用。方法人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD);以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的最优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3 ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析。结果成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法;在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08%vs 52.83%,P<0.01);在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20%vs 6.12%,P<0.05)。结论利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法;生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1DM的漏检率,为早期检测T1DM提供新方法。

关 键 词：糖尿病 谷氨酸脱羧酶 谷氨酸脱羧酶抗体 酶联免疫检测法 生物素-链霉亲合素 

分 类 号：R587[医药卫生—内分泌]