正交设计优化CYP2C19基因多态性PCR体系  

Optimization for PCR System of CYP2C19 Polymorphism Using Orthogonal Design

作　　者：赵冠人[1] 刘震[1] 冯端浩[1] 

机构地区：[1]解放军309医院药剂科,北京100091

出　　处：《解放军药学学报》2011年第6期480-483,共4页Pharmaceutical Journal of Chinese People's Liberation Army

摘　　要：目的建立通用的CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平,并确定最佳退火温度。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果 CYP2C19*2和CYP2C19*3基因PCR反应的最佳反应条件为25μl体系中包含:Mg2+(25 mmol/L)1.0μl、dNTPs(2.5 mmol/L)2.0μl、上游引物和下游引物(2.5μmol/L)各1.5μl、模板DNA约30 ng、10×PCR缓冲液2.5μl、Taq酶2 U、染料2.0μl,退火温度为55℃。结论建立了CYP2C19基因多态性检测方法的通用PCR反应条件。Objective To develop the most suitable PCR system for CYP2C19*2 and CYP2C19*3.Methods The orthogonal design was used to optimize PCR reaction system for CYP2C19*2 and CYP2C19*3 with five factors(Taq DNA polymerase,Mg2+,DNA template,dNTPs and primers) at four levels,respectively.Results The most suitable PCR system for CYP2C19*2 and CYP2C19*3 was established,namely,25 μl reaction system containing 1.0 μl Mg2+(25 mmol/L),2.0 μl dNTPs mix(2.5 mmol/L),1.5 μl primers(2.5 mmol/L),2.0 μl DNA(-30 ng),2.5 μl of 10×PCR buffer,2.0 U of Taq DNA polymerase,2.0 μl of dyestuff.The optimal annealing temperature was 55℃ based on gradient PCR.Conclusion This general system provides a standardized program for the CYP2C19 gene polymorphism.

关 键 词：正交设计 基因多态性 PCR体系 CYP2C19 

分 类 号：R968[医药卫生—药理学] R963[医药卫生—药学]