钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定  

Construction and characterization of Sodium coupled Neutral Amino acid Transporter SNAT2 HA fusion protein

作　　者：董晓云[1] 王函[1] 孟雯[1] 李洋[1] 张舟[1] 

机构地区：[1]上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234

出　　处：《上海师范大学学报（自然科学版）》2012年第1期83-88,共6页Journal of Shanghai Normal University(Natural Sciences)

基　　金：国家自然科学基金项目(30870560);上海市科学技术委员会项目(10540503400);上海市教育委员会科研创新项目(09ZZ1039);上海市重点学科建设项目(S30406);上海师范大学细胞生物学重点学科建设项目(DZL808)

摘　　要：钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.Sodium coupled Neutral Amino acid Transporter 2 （ SNAT2）, widespread expressed in the mammalian tissues, plays an important role in the pathways of glutamate glutamine cycle and gluconeogenesis. To determine easily SNAT2 expression and location in the membrane ,we construct an eukaryotie expression plasmid with HA at the C terminus of SNAT2 in pBK CMVA（ 1098 - 1300） by molecular biological methods. After transiently transfected into human embryonic kidney cells （HEK293T）, correctly expression and location of SNAT2 HA fusion proteins are observed in cell membranes by western blot. The plasmid pBK CMVA （ 1098 - 1300） SNAT2 HA provides a good tool for studying structure and function of SNAT2 in the future.

关 键 词：中性氨基酸转运蛋白SNAT2 融合蛋白 构建和鉴定 

分 类 号：Q31[生物学—遗传学]