鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定  

Expression and identification of G gene of spring viremia of carp virus(SVCV)in insect cell

作　　者：李月红[1] 付云红[1] 陈奇[2] 王永志[2] 扈荣良[3] 

机构地区：[1]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118 [2]解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122 [3]吉林省农业科学院,吉林长春130124

出　　处：《中国兽医学报》2012年第4期505-508,共4页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30972191);吉林省科技发展计划资助项目(20100232)

摘　　要：采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。The glycoprotein gene of spring viremia of carp virus was amplified by RT-PCR and Cloned into pFastBac 1 transfer vector.The recombinant plasmid was transformed into competent cells DH10 which contains a baculovirus shuttle vector（Bacmid） and a helper plasmid.After three antibiotics and white-blue plaque selection,the recombinant shuttle plasmid transfected to sf9 cells with Cellfectin Ⅱ Reagent induction.The recombinant baculovirus expressed in sf9 cells was detected by PCR with M13 primers,electron microscope,SDS-PAGE and Western blotting.The results indicated that the recombinant glycoprotein could be recognized by positive antiserum against SVCV and the molecular weight was about 58 000.

关 键 词：鲤鱼春季病毒出血症病毒 G基因 杆状病毒表达 

分 类 号：S943[农业科学—水产养殖]