全骨髓贴壁改良法分离培养人骨髓间充质干细胞及标记鉴定  

作　　者：许峰[1] 李宝平[1] 张雷[1] 孙琰玮[1] 潘晋坤[1] 

机构地区：[1]山西医科大学第二临床医院,山西太原030001

出　　处：《中国医学工程》2012年第2期62-64,共3页China Medical Engineering

摘　　要：目的对比、探求分离培养人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)的方法,探讨hMSCs鉴定和标记的方法,为进一步的实验研究打下基础。方法采集成人健康志愿者骨髓5mL,全骨髓贴壁法、全骨髓贴壁改良法、密度梯度离心法分离纯化、培养和扩增,获得hMSCs,对比三种方法。"慢冻速融"的原则进行细胞冻存、复苏。流式细胞术检测hMSCs的表面标志。hMSCs经5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记,免疫细胞化学法测定并评估。结果 hMSCs运用三种方法均可获得,比较全骨髓贴壁改良培养法最为方便高效分离获取hMSC、体外扩增迅速。流式细胞仪检测结果显示:CD44阳性及CD71弱阳性,表达率分别为95.05%,78.86%;CD34、CD45阴性,表达率分别为3.40%,2.88%。Brdu最佳标记浓度和时间分别为10μmol/L和72 h。结论 hMSCs采取全骨髓贴壁改良法进行较好的纯化和扩增,Brdu标记可用于hMSCs的生长和分化的动态示踪观察。有望建立hMSCs库,为组织工程、细胞移植研究打好基础。

关 键 词：人骨髓间充质干细胞 分离培养 流式细胞术鉴定 BRDU 

分 类 号：R551.3[医药卫生—血液循环系统疾病]