Na^+/Ca^(2+)交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na^+/Ca^(2+)交换电流的抑制作用  

作　　者：赵雷[1] 李明华[1] 杨啸燕[1] 高亚男[1] 封启龙[1] 吴博威[1] 

机构地区：[1]山西医科大学

出　　处：《中西医结合心脑血管病杂志》2012年第4期460-462,共3页Chinese Journal of Integrative Medicine on Cardio-Cerebrovascular Disease

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30900492);山西省青年科学基金资助项目(No.2009021043-1)

摘　　要：目的在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807-844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。结果经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α-2(840-877)抗血清效价达1∶243 000,纯化后抗α-2(840-877)抗体浓度为7.21mg/mL。纯化后的抗体在SDS-PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25kD和50kD左右。在1nmol/L～104nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响。此外,104nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用。通过氨基酸序列比对发现,α-2(807-844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7%,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因。结论在1nmol/L～103nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+交换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响。

关 键 词：心肌 Na+/Ca2+交换体 抗体 膜片钳技术 离子通道 

分 类 号：R392.5[医药卫生—免疫学]