重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达  

作　　者：马伟峰[1] 胡厚稳[2] 杨飞华[1] 蔡绍晖[3] 

机构地区：[1]南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广州510515 [2]温州医学院药学院,浙江温州325035 [3]暨南大学药学院,广州510632

出　　处：《广东医学》2012年第8期1097-1100,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81101732);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(编号:20104433120013)

摘　　要：目的制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况。方法以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5'端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN。PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN。荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况。结果构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN。结论成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础。

关 键 词：基质细胞衍生因子 饰胶蛋白聚糖 腺病毒载体 

分 类 号：R329.28[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]