兔岩藻糖基转移酶基因的克隆与原核表达  

Cloning and prokaryotic expression of rabbit fucosyltransferases

作　　者：哲名家[1,2] 张淼涛[1] 云涛[3] 王玢瑸[1,2] 刘光清[2] 

机构地区：[1]西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100 [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [3]浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,浙江杭州310021

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2012年第4期21-24,30,共5页Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition)

基　　金：国家自然科学基金项目(30870114);浙江省自然科学基金项目(3100396)

摘　　要：【目的】克隆兔岩藻糖基转移酶(FUT2)基因,并进行原核表达,为进一步研究RHDV的感染过程和致病机理奠定物质基础。【方法】从兔肌肉组织中抽提基因组DNA作为模板,PCR扩增出FUT2基因,然后将该基因亚克隆入原核表达载体pET30a中,获得重组原核表达质粒pET30a-FUT2。将该重组原核表达质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了FUT2基因,该基因长度为1 044bp。成功构建了原核重组表达质粒pET30a-FUT2,其诱导表达产物分子质量约为45ku;表达的重组FUT2蛋白可与His标签抗体发生抗原抗体反应。【结论】成功克隆了兔岩藻糖基转移酶基因,获得了分子质量约为45ku的FUT2蛋白。【Objective】 The research cloned and expressed Fucosyltransferases（FUT2）,to lay the basis for further exploring the infection process and pathogenesis mechanism of Rabbit hemorrhagic disease virus.【Method】 Extraction genome from rabbit muscle tissue,FUT2 gene was synthesized and sub-cloned into the pET30a vector,and then the recombinant plasmid pET30a-FUT2 transformed into E.coli.BL21（DE3）.The expression of the recombinant plasmid was induced by IPTG and analyzed by SDS-PAGE and Western-blot.【Result】 The results show that FUT2 gene is 1 044 bp in length,and the molecular weight of the recombinant protein,fused to his tag,is about 45 ku.【Conclusion】 FUT2 gene is successfully cloned,and the molecular weight of the recombinant protein is about 45 ku.

关 键 词：兔病毒性出血症病毒 岩藻糖基转移酶 原核表达 

分 类 号：S852.659.6[农业科学—基础兽医学] Q785[农业科学—兽医学]