牛筋草ISSR-PCR反应体系的建立与优化  

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system for Eleusine indica

作　　者：张杨[1] 张朝贤[2] 王金信[1] 魏守辉[2] 黄红娟[2] 

机构地区：[1]山东农业大学植物保护学院,泰安271018 [2]中国农业科学院植物保护研究所,中国农业科学院杂草鼠害生物学与治理重点开放实验室,北京100193

出　　处：《植物保护》2012年第3期90-94,共5页Plant Protection

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08012-025B)

摘　　要：以牛筋草地上组织为材料,采用正交优化和单因子试验两种方法对影响牛筋草ISSR-PCR体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度5个因素进行优化试验,建立适合牛筋草ISSR-PCR的反应体系。结果表明,牛筋草ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:Mg2+1.75mmol/L,dNTP 0.4mmol/L,Taq DNA聚合酶1U/25μL,引物0.3μmol/L,模板DNA 80ng/25μL,10×PCR Buffer 2.5μL/25μL。利用优化体系进行牛筋草的ISSR-PCR反应,可获得稳定性高、重复性好、背景清晰的电泳结果。The suitable ISSR-PCR reaction system of Eleusine indica was established by optimizing the concentrations of Mg^2＋ , dNTP, Taq DNA polymerase, primers and template DNA in the ISSR-PCR reaction system with orthogonal test and single-factor test. The best conditions were as followed： 1.75 mmol/L Mg^2＋ , 0.4 mmol/L dNTP, 1 U/25μL Taq DNA polymerase, 0.3μmol/L primer, 80 ng/25μL of DNA template and 2.5μL/25 μL of 10× PCR Buffer. With the optimized ISSR-PCR reaction system, the good results with high stability, repro- ducibility and clear background of electrophoresis could be obtained.

关 键 词：牛筋草 ISSR-PCR 正交设计 单因子试验 

分 类 号：S451[农业科学—植物保护]