高分辨率熔解曲线方法在指导华法林使用起始剂量基因分型中的应用及临床各种基因分型方法的比较  

Development of the high resolution melting method for genotyping CYP2C9 ＊ 3 （1075A/C, rs1057910 ） and VKORC1 （ -1639A/G, rs9923231 ）

作　　者：崔广林[1] 丁虎[1] 徐宇军[1] 陈琛[1] 汪道文[1] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科高血压病研究所,武汉430030

出　　处：《中华心血管病杂志》2012年第6期477-481,共5页Chinese Journal of Cardiology

基　　金：国家863计划项目（2006AA02A406）

摘　　要：目的探讨高分辨率熔解曲线（highresolution melting，HRM）方法对需接受华法林治疗患者进行CYP2C9＊3（1075A／C，rs1057910）和VKORC1（-1639A／G，rs9923231）基因分型和估计华法林起始剂量的可行性，同时比较不同基因分型方法的优缺点和使用价值。方法建立检测CYP2C9。3（1075A／C，rs1057910）和VKORC1（-1639A／G，rs9923231）两个多态性位点基因型的HRM方法，在接受华法林治疗的100例患者中进行基因型的检测与分析，并与传统的PCR一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP），TaqMan探针法及DNA测序法相比较。结果3种方法检测CYP2C9$3（1075A／C，rs1057910）和VKORC1（-1639A／G，rs9923231）的基因型完全一致，与DNA测序法相符合。而HRM方法更简单、经济、快速，临床应用的可行性高。100份临床标本的检测结果显示VKORC1—1639AA、AG、GG3种基因型分别有73（73％）、23（23％）和4例（4％）；CYP2C91075AA、AC、CC3种基因型分别有94（94％）、6（6％）和0例。敏感性和特异性分析结果发现HRM方法检测这两种突变的敏感性和特异性均为100％。结论HRM的方法能有效的检测CYP2C9＊3（1075A／C；rs1057910）和VKORC1（-1639A／G；rs9923231）基因多态性且与其他方法相比临床操作的可行性高。Objective To establish the high-resolution melting curve （HRM） approach for genotyping CYP2C9 ＊ 3 （1075A/C, rs1057910） and VKORC1 （-1639A/G, rs9923231 ） and explore its value on estimation of the Warfarin initial dose in comparison with various traditional genotyping methods. Methods CYP2C9 ＊ 3 （ 1075A/C, rs1057910） and VKORC1 （-1639A/G, rs9923231 ） genotyping was detected in 100 patients receiving Warfarin therapy by the newly developed HRM method and traditional genotyping methods including PCR-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） , TaqMan probe and DNA sequencing. Results The results of the genotypes obtained from above mentioned methods to detect CYP2C9 ＊ 3 （ 1075A,/C, rs1057910） and VKORC1 （-1639A/G, rs9923231 ） were similar and consistent. The HRM method is simpler, more economical, and faster compared to the traditional methods. The frequencies of the VKORCl-1639 AA, AG, GG genotypes from these 100 clinical samples were 73 （73%）, 23 （23%）, 4 （4%）, respectively; Frequencies of the CYP2C9 1075 AA, AC, CC genotypes were 94（94% ）, 6 cases （6%）, 0, respectively. Conclusions HRM approach can effectively detect CYP2C9＊ 3 （ 1075A/C, rs1057910） and VKORC1 （-1639A/G, rs9923231 ） polymorphisms and this method is simpler, more economical, and faster compared to the traditional methods for detecting CYP2C9 ＊ 3 （ 1075A/C, rs1057910） and VKORC1 （ -1639A/G,rs9923231 ） polymorphisms.

关 键 词：华法林 多态性 限制性片段长度 高分辨率熔解曲线 

分 类 号：R440[医药卫生—诊断学]