牛型布氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定  

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against Brucella abortus MDH recombinant protein

作　　者：童永亮[1,2] 韩先干[2] 孙晓庆[2] 丁铲[2] 胡青海[2] 丁家波[3] 王豪举[1] 于圣青[2] 

机构地区：[1]西南大学动物科技学院,重庆400716 [2]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241 [3]中国兽医药品监察所,北京100081

出　　处：《中国兽医科学》2012年第6期596-600,共5页Chinese Veterinary Science

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)项目(2010CB530202);中央级科研院所公益性研究专项(2012JB05)

摘　　要：为制备牛型布氏杆菌(Brucella abortus)苹果酸脱氢酶(MDH)单克隆抗体,将牛型布氏杆菌A19菌株的MDH基因进行克隆和表达,表达产物被纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,最终获得3株分泌牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别被命名为C2、D5和F4。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 600～1∶3 200,小鼠腹水效价为1∶12 800～1∶25 600;Western-blot检测结果表明,3株单克隆抗体均能与牛型布氏杆菌MDH重组蛋白发生特异性反应。结果表明,本研究成功制备了牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体,为基于MDH的布氏杆菌检测方法的建立奠定了基础。The malate dehydrogenase（MDH） of Brucella abortus A19 was expressed, purified and used for immunization to BALB/c mice. The spleen cells of the immunized BALB/c mice were collected and fused with SP2/0 cells, after three sub-clones. Three hybridoma cell strains C2, D5 and F4, which secret specific monoclonal antibodies（MAbs） against MDH,were obtained by ELISA. The antibody titers in the cell culture supernatant and ascites were from 1 ： 1 600 to 1 ： 3 200 and from 1 ： 12 800 to 1 ： 25 600, respectively. Western-blot analysis showed that three MAbs reacted with expressed brucella MDH protein specifically,which provided basis for further study of MDH.

关 键 词：牛型布氏杆菌 苹果酸脱氢酶 单克隆抗体 

分 类 号：S852.614[农业科学—基础兽医学]