链间二硫键改善FⅧ基因断裂转移小鼠血浆重链分泌和凝血活性  

作　　者：朱甫祥[1] 刘泽隆[1] 缪静[1] 屈慧鸽[1] 迟晓艳[1] 

机构地区：[1]鲁东大学生命科学学院,烟台264025

出　　处：《中国科学：生命科学》2012年第7期538-543,共6页Scientia Sinica(Vitae)

基　　金：山东省自然科学基金(批准号:ZR2010CM061);教育部留学回国人员科研启动基金(批准号:20071108)资助项目

摘　　要：体外细胞培养实验证明,双载体共转重链A2结构域Met662和轻链A3结构域Asp1828突变为Cys的B区缺失型凝血Ⅷ因子(BDD-FⅧ)基因可使共表达的重、轻链形成链间二硫键,重链的分泌水平得到改善.本文进一步观察小鼠体内双载体转此突变体BDD-FⅧ基因后血浆中重链的分泌量和凝血活性.构建一对含Cys662突变重链和Cys1828突变轻链真核表达载体,经门静脉注射双表达载体至C57BL/6小鼠体内,用ELISA法和Coatest法分别检测小鼠血浆中重链的分泌量和凝血活性为(239±56)ng/mL和(1.09±0.25)IU/mL,明显高于双载体共转野生型BDD-FⅧ基因对照小鼠((84±25)ng/mL和(0.36±0.12)IU/mL).结果表明,链间二硫键形成可有效增强转基因小鼠的血浆重链分泌,提高血浆凝血活性,改善双载体转BDD-FⅧ基因功效,为后续应用双AAV载体的血友病基因治疗研究提供实验依据.

关 键 词：凝血Ⅷ因子 双载体转基因 链间二硫键 重链分泌 凝血活性 

分 类 号：R554.1[医药卫生—血液循环系统疾病]