双重荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用  

作　　者：葛霞琴[1] 崔大伟[1] 谢国良[1] 陈理华[2] 王祥[3] 郑书发[1] 余斐[1] 秦志梅[1] 范剑[1] 陈凌晓[1] 王帅[1] 毛佳燕[1] 陈瑜[1] 

机构地区：[1]浙江大学医学院附属第一医院检验科,杭州310003 [2]浙江大学医学院附属儿童医院儿科,杭州310003 [3]湖州市中心医院检验科,浙江湖州313000

出　　处：《临床检验杂志》2012年第6期421-423,共3页Chinese Journal of Clinical Laboratory Science

基　　金："十二五"国家科技重大专项(2012ZX10004-210)

摘　　要：目的建立检测肠道病毒(EV)、B1型柯萨奇病毒(CVB1)的双重荧光定量RT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化双重荧光定量RT-PCR反应体系,建立标准曲线并评价该法的灵敏度、特异性和重复性,用该法检测150份病毒性心肌炎患儿治疗前肛拭子和29份治疗后粪便标本,并与文献提供的PCR法进行对比。结果该法对EV、CVB1型肠道病毒检测具有较高特异性,检出限均为2×10-2TCID50/mL;具有较好的重复性,CV均<2.3%;标准曲线的相关系数(r2)分别为0.999和0.997,扩增效率(%)分别为98.809和96.564;179份临床标本用该法检测95份为EV病毒,其中59份为CVB1病毒,与文献提供的PCR法结果符合率为98.88%(P均>0.05)。结论建立的双重荧光定量RT-PCR法可同时检测并区分EV和CVB1型病毒,适用于病毒性心肌炎临床标本的检测。

关 键 词：肠道病毒 柯萨奇病毒B1 双重荧光定量逆转录聚合酶链反应 

分 类 号：R512.5[医药卫生—内科学] Q786[医药卫生—临床医学]