表面展示鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建  

Construction of a Recombinant Baculovirus Surface Displaying S1 Protein of M41 Strain of Infectious Bronchitis Virus

作　　者：陈筱薇[1] 樊惠英[1] 林文耀[1] 程晓亮[1] 叶昱[1] 陈春丽[1,2] 廖明[1] 

机构地区：[1]华南农业大学兽医学院,农业部动物疫病防控重点实验室,广东广州510642 [2]四川农业大学动物医学院,四川雅安625000

出　　处：《华南农业大学学报》2012年第3期398-402,共5页Journal of South China Agricultural University

基　　金：国家自然科学青年基金(30800826);广东省博士启动基金(8451064201001131);农业微生物学重点实验室开发课题(20090010);华南农业大学校长基金(5500-K08240)

摘　　要：以鸡传染性支气管炎病毒M41毒株基因序列为模板,利用PCR方法扩增膜定位信号缺失的S1基因(dS1),将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将S1及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTMDual,得到重组质粒pFastBac-gp64-dS1.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-gp64-dS1,提取重组Bacmid质粒,以PCR验证其正确性.将阳性重组Bacmid质粒利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-dS1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以Sf9昆虫细胞膜表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白.The S1 （Spike） protein gene without membrane localization signal of infectious bronchitis virus （dS1） was amplified from infectious bronchitis virus （M41） by PCR and sub-cloned into pBACsurf-1. The fusion gene containing S1 and gp64 was then inserted into baculovirus transfer vector pFastBacTM Dual to construct the recombinant plasmid pFastBac-gp64-dS1. Then, the plasmid was transformed into Esch- erichia coli DH10Bac competent cells to obtain the recombinant shuttle vector Baemid-gp64-dS1. Extracted Baemid-gp64-dS1 was transfeeted into Sf9 cells to produce the recombinant baculovirus BV-dS1 by using LipofectamineTM 2000. Indirect immunofluorescent assay indicated that the recombinant baculovirus BV-dS1 could express S1 protein on infected Sf9 cell membrane.

关 键 词：鸡传染性支气管炎病毒 M41 表面展示 S1蛋白 重组杆状病毒 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]