一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法  

A Rapid High-Resolution Melting Curve Method to Detect Genotypes of CLN6 Mice

作　　者：许淼[1,2] 王娟[1,2] 龚秀丽[1,2] 蔡勤[1,2] 颜景斌[1,2] Nanbert Zhong 曾凡一[1,2,3] 黄淑帧[1,2] 

机构地区：[1]上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学遗传研究所,上海市200040 [2]卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室,上海市200040 [3]上海交通大学医学院医学科研研究院发育生物学研究室,上海市200025

出　　处：《医学分子生物学杂志》2012年第3期161-165,共5页Journal of Medical Molecular Biology

基　　金：国家遗传学重点学科,国家临床重点专科建设项目,上海市重点学科（B204）,国家“863”计划项目（No.2007AA022400）,上海市曙光计划跟踪项目（No.10GG10）

摘　　要：目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型，同时通过直接测序法进行验证，评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测，共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只，HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染以及准确度高等优点，值得推广。Objective To establish a rapid detection method to for genotype CLN6 （ceroid-li- pofuscinosis, neuronal 6） mice with high-resolution melting curve （HRM） analysis. Methods Ac- cording to published mouse Cln6 NCBI sequence （ NC 00075 ） , HRM primers and sequencing prim- ers were designed, then used to obtain high-resolution melting curves identifying mouse genotypes by HRM technique. The sensitivity and accuracy of HRM results were verified by direct sequencing. Results Among 181 mice analyzed, 11 wild-type, 73 heterozygous and 97 homozygous for the Cln6 mutation were identified by HRM, which was completely consistent with direct sequencing. Conclu- sion Using HRM to detect small mutations in DNA is a simple, rapid, sensitive, accurate and sin-gle-tube procedure that may decrease contamination.

关 键 词：高分辨熔解曲线 神经元蜡样脂褐质沉积症 Cln6模型小鼠 

分 类 号：R34[医药卫生—基础医学]