基于两相预柱的在线二维分离系统用于人肝组织中磷酸肽的规模化鉴定  

Online Multidimensional Separation System Based on the Biphasic Trap Column for Large Scale Phosphorylation Analysis of Human Liver

作　　者：宋春侠[1] 王方军[1] 程凯[1] 边阳阳[1] 叶明亮[1] 邹汉法[1] 

机构地区：[1]中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室国家色谱研究中心,辽宁大连116023

出　　处：《分析测试学报》2012年第9期1070-1074,共5页Journal of Instrumental Analysis

基　　金：中国科学院科研装备研制项目(P020090520);国家自然科学基金创新群体项目(21021004)

摘　　要：将C18反相(RP)填充柱和磷酸基强阳离子交换(SCX)整体柱集成于一体的RP-SCX两相预柱,成功用于RPLC-MS/MS系统的自动进样和SCX分级,完成了磷酸肽在线多维分离平台的构建,可以减少样品的损失,极大地提高了系统的集成化水平和检测灵敏度。对人肝组织酶解液富集的磷酸肽进行规模化鉴定,在假阳率小于1%的情况下,共鉴定到3 082条非重复的磷酸化肽段、3 056个磷酸化位点和1 332个磷酸化蛋白。对所鉴定到的磷酸化蛋白进行了功能分类和激酶分析。该实验结果对于了解蛋白质磷酸化在肝脏组织中发挥的生理学作用具有重要意义。A fully automated online multidimensional separation system,which is based on a reversed phase-strong cation exchange（RP-SCX） biphasic trap column,was developed for the large scale phosphorylation analysis of human liver.Compared with the conventional online SCX-RP system and off-line mode,the biphasic column can reduce the sample loss and improve the detection sensitivity.This system was applied in the large scale phosphorylation analysis of human liver and a total of 3 082 unique phosphopeptides,including 3 056 unique phosphorylation sites corresponding to 1 332 phosphoproteins were identified under the FDR〈1%.The molecular function and motif analysis of phosphoproteins has revealed the important role of phosphorylation in the liver physiological functions.

关 键 词：在线多维色谱 磷酸肽 蛋白质组学 人肝 

分 类 号：O657.7[理学—分析化学] O629.73[理学—化学]