抗真菌KP4蛋白的原核表达载体构建与表达  

作　　者：孔冉[1,2] 冯翠莲[2] 李晓君[1,2] 郭婷[1,2] 张树珍[2] 

机构地区：[1]海南大学农学院,海南海口570228 [2]中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心,海南海口571101

出　　处：《江苏农业科学》2012年第8期11-13,14,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31101197);现代农业产业技术体系建设专项基金(编号:nycytx-24);中央级公益性科研院所基本科研业务费(编号:ITBBZD0724)

摘　　要：为制备KP4的多克隆抗体,将KP4编码框克隆到pMD19-T中,载体经测序后,亚克隆到原核表达载体pET32a中,获得了KP4的原核表达载体PET-KP4。将构建成功的KP4原核表达载体转化宿主菌BL21(DE3)并用IPTG对重组菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析诱导后重组菌的总蛋白显示,融合蛋白大小约为31 ku,以包涵体形式存在;对融合蛋白的表达条件进行了优化,KP4大量表达最佳培养温度为37℃,诱导剂IPTG的最佳浓度为1.0 mmol/L,最佳诱导培养时间为8 h;对目标蛋白进行包涵体破碎,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析对总蛋白进行了纯化。SDS-PAGE电泳分析与蛋白浓度测定结果显示,目的蛋白纯度好,浓度达到了236μg/mL。

关 键 词：KP4 包涵体 温度 IPTG 纯化 

分 类 号：Q812[生物学—生物工程]