德国小蠊变应原Bla g 8的克隆表达及进化分析  

Molecular Cloning and Expression of Bla g 8 Gene from Blattella germanica

作　　者：龙高群[1] 张春林[1] 

机构地区：[1]贵阳医学院生物教研室,贵阳550004

出　　处：《生物技术通报》2012年第9期173-178,共6页Biotechnology Bulletin

基　　金：贵州省社发攻关项目(黔科合S系[2007]1038);贵阳医学院研究生创新计划专项基金

摘　　要：通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。It was to clone the Bla g 8 gene of Blattella germanica, analyze its sequence, express recombinant protein of the Blattella germanica Bla g 8, predict the protein structure. Base on a fragment sequence of the Bla g 8 from NCBI, obtained full-length Bla g 8 sequence by RACE. Constructed the recombinant plasmid pET32a （ ＋ ） -B8, expressed His-B8 fusion protein in E. coli BL21 （ DE3 ） by IPTG induction, and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Results showed the BlatteUa germanica Bla g 8 gene includ an reading fragme of 618 bp code for 205 amino acid residues. It was found the full-length of Bla g 8 gene from Blattella germanica, construct the recombinant plasmid pET32a （ ＋ ） -B8, expressed His-GAPDH fusion protein.

关 键 词：德国小蠊 变应原 序列分析 原核表达 

分 类 号：R384[医药卫生—医学寄生虫学]