重组人尿激酶原在CHO细胞中的高效表达及其纯化  

Efficient expression of recombinant human pro-urokinase in CHO cells and its purification

作　　者：李世崇[1] 叶玲玲[1] 刘红[1] 张正光[1] 高丽华[1] 胡显文[1] 陈昭烈[1] 

机构地区：[1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100071

出　　处：《生物加工过程》2012年第5期50-54,共5页Chinese Journal of Bioprocess Engineering

基　　金："重大新药创制"科技重大专项资助项目(2009ZX09503-011)

摘　　要：用鸡β-globin的MAR序列和人看家基因延伸因子1α(hEF-1α)的调控序列以及旱獭RNA稳定与输出序列,构建了重组人尿激酶原(recombinant human pro-urokinase,rhPro-UK)的高效表达载体,在CHO细胞中获得了rhPro-UK的高效稳定表达,rhPro-UK的表达水平达到1 299 IU(以百万细胞1 d的表达量计)。采用阳离子交换层析、疏水层析和凝胶排阻层析的三步工艺纯化表达rhPro-UK的CHO细胞培养上清液,rhPro-UK的纯度达到98%、回收率为60%～70%。The efficient expression vector for recombinant human pro-urokinase （rhPro-UK） was construc- ted with the combination of chicken β-globin MAR sequences, human elongation factor alpha! （hEF-lα） housekeeping gene regulatory sequences, and RNA stability and the output sequence. The rhPro-UK ex pression level reached 1 299 IU/cells6/d in CHO （Chinese hamster ovary） cell lines. The rhPro-UK containing supernatant purified with cation exchange chromatography, hydrophobic interaction chromatog- raphy, gel exclusion chromatography process resulted in rhPro-UK purity over 95 % with recovery rate of 60% - 70%.

关 键 词：CHO细胞 重组人尿激酶原 表达 纯化 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]