骨髓单个核细胞Coombs试验阳性血细胞减少患者骨髓红系造血细胞膜靶抗原初步研究  

Preliminary study of autoantigens on the membrane of erythropoietic cells of the patients with BMMNC-Coomb＇s test（＋） hemocytopenia

作　　者：付蓉[1] 刘惠[1] 王珺[1] 李丽娟[1] 王红蕾[1] 王一浩[1] 邵宗鸿[1] 

机构地区：[1]天津医科大学总医院血液科,300052

出　　处：《中华医学杂志》2012年第38期2689-2693,共5页National Medical Journal of China

基　　金：国家“十一五”科技支撑项目（2008BA161B00）;国家自然科学基金（30670886、30470749、30971285）;高等学校博士学科点专项科研基金（200800620004）;天津市科技支撑计划重点项目（07ZCGYSF00600）;天津市应用基础及前沿技术研究计划（08JCYBJC07800）;天津市卫生局科技基金项目（03KZ26）;天津市高等学校科研基金（200317）

摘　　要：目的了解骨髓单个核细胞Coombs（BMMNC-Coombs）试验阳性（＋）血细胞减少（又称免疫相关性血细胞减少症，IRP）患者骨髓红系造血细胞膜上促红细胞生成素受体（EPOR）表达量与自身抗体（IgG／IgM）的关系，探索自身抗体可能的作用靶点。方法对46例初治IRP患者[15例有核红细胞自身抗体阳性（＋）、31例有核红细胞自身抗体阴性（-）]及18名健康对照应用流式细胞术（FCM）检测骨髓红系造血细胞膜上EPOR表达量，分析自身抗体与EPOR表达水平的相关性；反转录（RT）-PCR技术检测EPORmRNA的表达水平；FCM分选骨髓红系造血细胞后，Western印迹法检测信号转导蛋白Star5及磷酸化Stat5（P—Stat5）蛋白表达水平以观察EPO／EPOR信号通路是否受抑；利用甘氨酸缓冲液洗脱3例自身抗体IgM强阳性患者骨髓红系造血细胞膜上结合的自身抗体，重新标记后再次检测EPOR的表达水平。结果（1）IRP患者有核红细胞自身抗体（＋）组EPOR表达量为1．6％±0．9％，明显低于自身抗体（-）组（4．6％±4．1％，P〈0．01），而后者明显高于健康对照组（2．3％±1．8％，P〈0．05）。IRP患者有核红细胞膜上EPOR与自身抗体呈显著负相关（r=-0．543，P=0．000），EPOR（Y）与自身抗体（x）的直线回归方程为：Y=0．040—0．335X。（2）有核红细胞自身抗体（＋）组EPORmRNA表达水平为（0．68±0．14），明显高于自身抗体（-）组（0．55±0．12，P〈0．01）和健康对照组（0．58±0．12，P〈0．05）。（3）有核红细胞自身抗体（＋）组Stat5蛋白表达明显高于健康对照组（1．45±0．94比0．54±0．36），P—Stat5蛋白表达明显低于健康对照组（0．42±0．18比0．85±0．38）（均P〈0．05）；而自身抗体（-）组Stat5、P—Stat5蛋白表达水平（0．75±0．69、0．70±0．18）与健康对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。（Objective To observe the relationship between erythropoietin receptor （EPOR） and autoantibodies-IgG/IgM （auto-Ab） on the membrane of erythropoietic cells of the patients with bone marrow mononuclear cells （BMMNC） -Coomb＇s test （ ＋ ） hemocytopenia （ immunorelated pancytopenia （IRP） ） and explore the probable autoantigens of auto-Ab in IRP. Methods A total of 46 newly diagnosed IRP patients （ 15 with auto-Ab on erythropoietic cells and 31 without） and 18 healthy controls were enrolled. The EPOR expressions on their nuclear erythrocytes were tested with flow cytometry （FCM） to observe the relationship between EPOR and auto-Ab. EPOR mRNA was detected by reverse transcription （RT）-PCR. Star5 and P- Stats proteins in nucleated erythrocytes were measured by Western blot. EPOR expressions on nucleated erythrocytes membrane were re-tested after stripping autoantibodies with glycine buffer. Results （ 1 ） EPOR of auto-Ab（ ＋ ） group（ 1.6% ± 0. 9% ） was significantly lower than that of auto-Ab （ - ） group（4. 6% ±4. 1% ,P 〈0.01 ） and the latter was significantly higher than that of normal controls（2. 3% ± 1.8% ,P 〈 0.05）. EPOR of IRP patients was inversely correlated with their auto-Ab （ r = - 0. 543, P = 0. 000）. （2） EPOR mRNA of auto-Ab（ ＋ ） group（0. 68 ±0. 14）was significantly higher than that of auto-Ab （ - ） group （0. 55 ±0. 12,P 〈0. 01 ）and normal controls（0. 58 ±0. 12,P 〈0.05 ）. （3） Protein Stats of auto-Ab （ ＋ ） group （ 1.45 ± 0. 94） was significantly higher than that of normal controls （0. 54 ± 0. 36, P 〈 0. 05 ）. While P- Stats of auto-Ab（ ＋ ） group（0. 42 ±0. 18）was significantly lower than that of normal controls（0. 85 ±0. 38, P 〈 0. 05）. （4） EPOR expression increased significantly after auto-Ab stripping. Conclusions The auto- Ab of some IRP patients blocks or competitively inhibits EPOR on the membrane of erythropoietic ceils. And EPOR may be one of autoantigens

关 键 词：全血细胞减少 受体 红细胞生成素 自身抗体 

分 类 号：R55[医药卫生—血液循环系统疾病]