蝴蝶兰随机扩增多态性DNA分子标记体系优化  

Optimization of Random Amplified Polymorphic DNA Reaction System in Phalaenopsis

作　　者：崔广荣[1] 胡能兵[1] 张子学[1] 何克勤[1] 

机构地区：[1]安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100

出　　处：《种子》2012年第10期29-34,共6页Seed

基　　金：安徽科技学院自然科学基金省级预研项目(编号:ZRC 2011291);安徽省自然科学基金项目(编号:070411010)

摘　　要：采用改良的SDS法提取蝴蝶兰叶片基因组DNA,并以其为模板对影响随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增反应的主要因子采用递进分析方法进行优化,建立了蝴蝶兰RAPD反应体系。结果表明,所提DNA达到10 ng/μL,优化后的20μL反应体系为:10 mmol/L的dNTPs 0.5μL,10 ng/μL的模板DNA 0.5μL,25 mmol/L的MgCl22.4μL,2 U Taq聚合酶,10μmol/L的引物0.5μL,10×Buffer溶液2μL,双蒸水15.7μL。优化后的扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,42次循环,最后72℃延伸10 min。The modified SDS method was used for extraction DNA of Phalaenopsis, and reaction optimization of random amplified polymorphic based on progressive analysis of major factors to establish the best RAPD reaction system. The results showed that, concentration of DNA extracted reached 10 ng/μL,20μL of optimized system was ：0.5μL of dNTPs （ 10 retool/L） ,0.5μL of DNA（ 10 ug/μL） ,2.4μL of MgC12 （25 retool/L）, 2 U of Taq polymerase,0.5μL of primers（ 10μmol/L） ,2μL of 10 x Buffer and 15.7/μL of ddH20. Meanwhile, optimizing PCR procedure followed the 1 cycle of denaturing for 5 min at 94 ℃ ,42 cycles of denaturing for 1 min at 94 ℃, annealing for 1 min at 36 ℃, primer extension for 1.5 min at 72 ℃, and the last cycle of extension for 10 rain at 72 ℃.

关 键 词：蝴蝶兰 随机扩增多态性DNA 优化 

分 类 号：S682.31[农业科学—观赏园艺]