6种虫媒病毒PCR-Mass检测方法的建立  

Establishment of PCR-Mass Assay for the Detection of Six Arboviruses

作　　者：朴静子[1,2] 王晓宏[2] 陈唯军[2] 杨银辉[2] 姜永强[2] 曹远银[1] 

机构地区：[1]沈阳农业大学植物保护学院,沈阳110161 [2]军事医学科学院微生物流行病研究所,北京100071

出　　处：《沈阳农业大学学报》2012年第3期300-305,共6页Journal of Shenyang Agricultural University

基　　金：国家科技重大专项项目(2009ZX10004-103)

摘　　要：建立了一种可快速、同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、西尼罗病毒(WNV)、森林脑炎病毒(TBEV)和圣路易脑炎病毒(StLEV)等6种虫媒病毒的PCR-Mass检测方法。根据GenBank登录的上述6种病毒的序列信息,经过分析比对,设计6组扩增引物和延伸探针,初步建立针对上述6种病毒的PCR-Mass检测体系。采用上述6种虫媒病毒和其他常见致病性病毒为检测对象,确定PCR-Mass体系的特异性;通过对重组质粒的定量检测,确定该体系的检测灵敏度;并利用该体系对12份TBE阳性和10份JEV阳性脑脊液样本进行检测,评价检测方法的实用性和临床应用价值。结果表明:PCR-Mass检测方法可同时检测上述6种虫媒病毒,而对其他病毒检测均为阴性,无交叉反应现象;6种虫媒病毒的最低检出浓度均为102copies.mL-1;对22份阳性样本的检测结果均呈阳性。本研究建立的PCR-Mass检测方法可实现对6种虫媒病毒的快速、同时检测,具有良好的特异性和较高的灵敏度。A novel PCR-Mass assay was developed for simultaneous detection of six arboviruses,namely,Encephalitis B virus（JEV）,Forest encephalitis virus（TBEV）,West Nile virus（WNV）,Eastern equine encephalitis virus（EEEV）,Western equine encephalitis virus（WEEV）,and St Louis encephalitis virus（StLEV）.Multiplex primers and extension probes were designed from conserved regions obtained from the GenBank database.Viral isolates and standard samples were used to determine the sensitivity and specificity of the PCR-Mass assay.Clinical performance was assessed with a total of 22 cerebrospinal fluid（CSF） samples from culture-positive patients.The limit of detection for the novel assay was 102 copies.mL-1.The identification of specific viruses and clinical specimens showed that the PCR-Mass is a useful method for simultaneous detection up to six distinct arboviruses.

关 键 词：虫媒病毒 PCR-Mass方法 同时检测 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学] R373[农业科学—兽医学]