牙鲆RAG2基因的质粒构建和体外原核表达  

Construction and expression of a prokaryotic vector of recombinant olive flounder RAG2

作　　者：王先磊[1,2] 谭训刚[1] 张培军[1] 徐永立[1] 

机构地区：[1]中国科学院海洋研究所,实验海洋生物学重点实验室,山东青岛266071 [2]青岛国家海洋科学研究中心,山东青岛266071

出　　处：《海洋科学》2012年第9期59-63,共5页Marine Sciences

基　　金：国家863计划资助项目(2012AA092203);国家自然科学基金项目(30800838);山东省自然科学基金项目(Y2008E12)

摘　　要：将牙鲆(Paralichthys olivaceus)RAG2 cDNA序列插入到体外表达质粒pProEXTM HT,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21中进行体外表达,分析了诱导时间和IPTG浓度对重组蛋白产生量的影响,确定了最佳诱导条件为:诱导时间为3 h,IPTG诱导浓度0.2 mmol/L。本研究同时对RAG2重组蛋白的可溶性进行确认,并利用BD TALONTM金属亲和柱纯化了RAG2蛋白。本研究结果为进一步深入研究RAG2蛋白的生物学功能奠定了良好的基础。The full length of olive flounder RAG2 cDNA was ligated to plasmid pPROEXTM HT, and was trans-ferred into Escherichia coli （BL-21） for recombinant protein expression. It showed that the protein expression was induced by IPTG. The optimal concentration of IPTG and optimal induction time were 0.2 mmoL/L and 3 h, respectively. The recombinant RAG2 protein was purified by BD TALONTM Metal Affinity Resins. This study will be useful for further research on the function of flounder RAG2.

关 键 词：牙鲆(Paralichthys olivaceus) RAG2 重组 纯化 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]