人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备  

作　　者：蒋茜[1] 施良[2] 牟笑[2] 毛朝明[1,2] 

机构地区：[1]江苏大学附属医院免疫学重点实验室,江苏镇江212001 [2]江苏大学附属医院核医学科,江苏镇江212001

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2012年第12期1300-1302,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：镇江市社会发展支撑计划项目(SH2011019);江苏大学临床医学发展项目(JLY2010157)

摘　　要：目的:表达人UL16结合蛋白1(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,对表达产物进行鉴定。用镍柱对人ULBP1重组蛋白进行纯化,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法对制备的多克隆抗体进行生物学鉴定。结果:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP1(aa81～244),并获得了高纯度的人pQE30-ULBP1(aa81～244)重组蛋白。制备的多克隆抗体能够识别肺癌细胞株A549表面表达的天然构象ULBP1分子。结论:成功表达了人ULBP1(aa81～244)重组蛋白并成功制备了兔抗人ULBP1的多克隆抗体。

关 键 词：UL16结合蛋白1 重组蛋白 多克隆抗体 

分 类 号：R593.2[医药卫生—内科学] R392.11[医药卫生—临床医学]