转染IκB激酶2的显性负性突变体的受者未成熟树突状细胞诱导产生的CD4＋CD25-T细胞致耐受特性  

Dominant negative form of Ir, B kinases 2-transfected recipient immature dendritic cells induce CD4 ＋ CD25 - T cells with tolerogenic properties

作　　者：杜科霖 樊彩斌[2] 温端改[2] 侯建全[2] 欧阳骏[2] 张东兴[3] 

机构地区：[1]潍坊市第二人民医院泌尿外科,261041 [2]苏州大学附属第一医院泌尿外科 [3]北京市门头沟区医院泌尿外科

出　　处：《中华实验外科杂志》2012年第12期2439-2441,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81070591）;江苏省医学重点人才基金资助项目（RC2007080）;江苏省卫生厅科研基金资助项目（H200610）

摘　　要：目的探讨体外转染抑制性蛋白IKB激酶2的显性负性突变体（IKK2dn）基因的受者大鼠未成熟树突状细胞（imDC）诱导产生的CD4±CD25-T细胞致耐受作用的特性及机制。方法将含IKK2dn基因的腺病毒载体按1：200的感染复数（200MOI）体外转染受者Lewis大鼠骨髓源性imDC，2d后负载供者BN大鼠抗原，48h后与受者大鼠T细胞初次混合淋巴细胞反应（MLR），72h后免疫磁珠法分离筛选混合淋巴细胞反应（MLR）中诱导产生的CD4±CD25-T细胞，将获得的CD4±CD25-T细胞与受者大鼠T细胞再次MLR72h，检测其对T细胞增殖反应的影响，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定MLR上清中白细胞介素（IL）-2、IL-10、转化生长因子（TGF）-p和干扰素（IFN）-1的水平。结果Westernblot结果显示，转染IKK2dn基因的imDC稳定、高效表达IKK2dn。转染IKK2dn受者imDC诱导产生的CD4＋T细胞低表达CD25（18．50±1．40）％，与未转染组（72．20±3．30）％及转染空载体组（63．70±1．80）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染IKK2dn诱导产生的CD4＋CD25-T细胞能抑制异种抗原刺激引起的受者T细胞的增殖反应（0．044±0．006），与转染空载体所诱导产生的CD4＋T细胞比较（0．419±0．014），差异有统计学意义（P〈0．05）。MLR中高比例的CD4＋CD25-T细胞能够明显抑制受者T细胞的增殖反应（0．044±0．006），与低比例组比较（0．106±0．006），差异有统计学意义（P〈0．05），且CD4＋CD25-T细胞介导的MLR上清液中IL-10、TGF—β水平明显升高（P〈0．05），IL-2、IFN-γ水平明显降低（P〈0．05）。结论转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者imDC可以诱导受者T细胞产生CD4＋CD25-T细胞，此种CD4＋CD25-T细胞能够引起受者T细胞针对供者抗原的特异性低反应，具有诱导免疫耐受的作用。Objective To investigate the characteristics and mechanisms of the immune tolerance of CD4 ＋ CD25-T cells induced by recipient-derived immature dendritic cells （imDC） transfected with domi- nant negative form of IKB kinases 2 （IKK2dn） and loaded with donor antigens. Methods ImDC were ob- tained from recipient rats＇ （Lewis） bone marrow, transfected with IKK2dn at 200 multiplicities of infection （MOI） （200 MOI） for 2 days, loaded with donor antigens for 48 h, and cultured with Lewis （LW） lym- phocytes in primary mixed lymphocyte reaction （MLR） for 72 h. Thereafter, the CD4 ＋ CD25 - T cells were purified from primary MLR and incubated in secondary cocuhure MLR with LW lymphocytes for another 72 h. The T lymphocyte proliferation in vitro was measured by MTI＂ and the expression of serum intedeukin （IL）-2, IL-10, transforming growth factor-~ （TGF-13） and interferon （IFN）-~ was detected by using ELISA. Results Western blotting revealed high and stable expression of IKK2dn gene in imDC transfected with IKK2dn gene. In contrast to the untransfected imDC group （72. 20 _＋ 3.30）% and the recipient Adv- 0 transfected imDC group （ 63.70 -＋ 1.80） % , the CD4 ＋ T cells induced by recipient imDC transfected with IKK2dn contained a very low percentage of CD25 （ 18.50 ± 1.40） % （ P 〈 0. 05 ）. As compared with the CIM ＋T ceils induced by Adv0-DC （0.419±0.014） , the CD4＋ CD25-T ceils induced by Adv-IKK2dn- DC could inhibit recipient T cells proliferation （ 0. 044± 0. 006 ） （ P 〈 0. 05 ）. The CD4 ＋ CD25 - Y cells were able to completely suppress the recipient T cells proliferation at high ratio （0. 044 ± 0. 006 ）, but at low ratio the suppressive effect Was no longer evident （0. 106±0. 006） （P 〈0. 05）. There was a stronger secretion of IL-10 and TGF-[3 （P 〈0.05） and a weaker secretion of IL-2 and IFN-~/ （P 〈0.05） in the su- pernatants in MLR. Conclusion Recipient-derived imDC transfected with IKK2dn and loaded wit

关 键 词：树突状细胞 IκB激酶2 淋巴细胞反应 CD4 T细胞 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]