大豆GmGBP1基因的原核表达及重组蛋白纯化  

Prokaryotic Expression and Protein Purification of Soybean GmGBP1 Gene

作　　者：张彦威[1] 刘丽雪[1] 赵琳[1] 谷月娇[1] 卢清瑶[1] 宋仙萍[1] 李文滨[1] 

机构地区：[1]东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室,东北农业大学农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室,黑龙江哈尔滨150030

出　　处：《大豆科学》2012年第6期874-877,共4页Soybean Science

基　　金：国家自然科学基金(31101169,30671318,31271748);转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08004-005);黑龙江省教育厅大豆分子设计团队项目;黑龙江省教育厅省高校青年学术骨干项目;东北农业大学博士基金

摘　　要：将大豆中已克隆的一个新的SKIP基因(GmGBP1)构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,对其进行IPTG诱导。结果表明:在IPTG浓度为0.1 mmol.L-1,诱导时间为8 h,诱导温度为37℃时,重组蛋白得到表达,分子量大约为95 kDa,SDS-PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在,用8 mol.L-1尿素对其进行溶解后经GST柱纯化,得到较好的纯化效果。A new SKIP homolog in soybean was constructed into prokaryotic expression vector pGEX-6p-1 and then transformed into E.coli BL21（DE3）to get the expression protein for further study.The result indicated that an 95 kDa recombinant protein was expressed with the treatment of 0.1 mmol·L-1IPTG for 8 h at 37℃,the recombinant protein was confirmed to mainly existed in inclusion body form by SDS-PAGE.The high-quality recombinant protein was obtained through GST column purification after the inclusion body was dissolved with 8 mol·L-1 urea.

关 键 词：大豆 SKIP 原核表达 包涵体 纯化 

分 类 号：S565.1[农业科学—作物学]