抗SEB单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的基因构建和表达  

作　　者：孙元杰[1] 李永明[1] 刘志佳[1] 张葵[1] 魏玉英[1] 宋朝君[1] 周幸春[1] 金伯泉[1] 杨琨[1] 

机构地区：[1]第四军医大学基础医学院免疫学系,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2013年第1期69-71,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：重大新药创制科技重大专项(2008ZXJ09003-009;2012ZX09J12106-02B)

摘　　要：目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。方法从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因;通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达。通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性。结果测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性。结论制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础。

关 键 词：SEB 抗体可变区 单链抗体 蛋白表达 酶联免疫吸附法 

分 类 号：R392.1[医药卫生—免疫学]